Tampón de electroforesis Preparación

September 19

Tampón de electroforesis Preparación


La electroforesis en gel es uno de los procedimientos más comunes realizados en bioquímica y laboratorios de biología molecular. Este procedimiento requiere el uso de una solución tampón que se realizó con éxito. Conocer cómo preparar la solución tampón asegura un suministro listo cuando surja la necesidad.

Función

electroforesis en gel eficaz requiere una solución tampón. Durante la electroforesis, la matriz de gel se sumerge en una solución que permite la conductividad eléctrica y mantiene un pH constante. La concentración de la solución tampón también juega un papel crítico en la tasa de migración de las moléculas siendo separada. Una alta concentración de tampón causará migración más rápida. Además de seleccionar la concentración del tampón utilizado durante un procedimiento de la electroforesis, el tipo de tampón usado también juega un papel importante.

Tipos de amortiguamiento

Las dos memorias intermedias que se utilizan con mayor frecuencia durante la electroforesis en gel son tris-acetato-EDTA (TAE) y tris-borato-EDTA (TBE). La determinación de qué buffer a usar depende de una variedad de factores. TAE es muy eficaz para la separación de fragmentos más grandes de 4.000 pares de bases. También se usa para separar el ADN super-espiral.

TBE es más eficaz para fragmentos de entre uno y 3000 pares de bases de longitud. También es la solución más eficaz al utilizar cantidades tensión superior a 150 voltios.

Preparación de TAE

Preparar una solución de stock 50X TAE consta de tres pasos y cuatro ingredientes. Para cada litro de solución deseada, mezclar 242 gramos de base de Tris con unos 600 mililitros de agua desionizada hasta que se disuelva. Añadir 57,1 ml de ácido acético glacial y 100 mililitros de 0,5 EDTA molar, pH 8,0. Por último, añadir agua desionizada hasta que el volumen de solución final llega a un litro. Almacenar bien cubierto a temperatura ambiente.

Preparación de TBE

Para preparar un litro de solución de TBE 50X de valores, se combinan 540 gramos de base de Tris con unos 600 mililitros de agua desionizada y se agita hasta que se disuelva. Mezclar en 275 gramos de ácido bórico y 200 mililitros de 0,5 EDTA molar, pH 8,0. Añadir agua desionizada hasta que el volumen total de la solución llega a un litro. Autoclave durante 20 minutos y luego herméticamente cerrado a temperatura ambiente.

La dilución y Uso

Estas soluciones madre muy concentradas pueden diluirse hasta concentraciones menores, según sea necesario mediante la mezcla de cantidades menores de las soluciones madre con agua desionizada.


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