Cómo restablecer una columna C18

January 6

Cómo restablecer una columna C18


Líquida de Alta Presión La cromatografía (HPLC) es una herramienta para la separación de productos químicos de una mezcla. La separación y la identificación de productos químicos en particular dentro de una mezcla se produce principalmente en la columna de HPLC en el sistema. Muchos tipos de columnas están disponibles para los sistemas de HPLC y cada tipo está destinado a un tipo específico de análisis. La columna C18 es la columna más fuerte no polar usado generalmente. Después de un uso continuo durante un período prolongado de tiempo, la velocidad de flujo de disolvente a través de la columna disminuye y extiende el tiempo de análisis para un análisis. Otra causa de la desaceleración de análisis está teniendo muestras dejar pequeñas cantidades de productos químicos en el material de la columna y la reducción de la capacidad de la columna para separar los productos químicos. La regeneración de la superficie de la columna se realiza tratando el material de embalaje a una serie específica de disolventes para limpiar las muestras sobrantes en la columna y revitalizar el material de soporte.

instrucciones

1 Desconectar la columna C18 de la corriente de flujo y reemplazar la columna en la dirección inversa. Ejecución del disolvente a través de la columna en la dirección opuesta se aflojará el efecto de embalaje que se produce con el tiempo. Se debe tener cuidado de no perder una gran cantidad de material de embalaje del final de la columna. Algunos fabricantes utilizan una malla más grande en el extremo de aguas arriba de la columna, de modo que cuando la dirección del flujo se invierte la malla más grande está en la posición aguas abajo. Este método de regeneración se denomina lavado a contracorriente. Para protegerse contra el material de embalaje que fluye hacia el detector del sistema y posiblemente causando un tapón, permite que el sistema funcione sin el detector conectado y dirigir el flujo de salida de la columna a los residuos.

2 Se coloca el tubo de entrada de disolvente en una serie de disolventes para provocar la elución de cualquier compuesto retenidas con la columna en la dirección inversa. La serie de disolventes utilizados varían en sus características hidrófilas. Variando los disolventes se le eluir compuestos de naturaleza hidrofílica igualmente variada. Utilice 50 ml de cada uno de los siguientes disolventes sucesivamente: agua (si está utilizando un tampón en su disolvente), metanol, isopropanol, diclorometano, hexano, diclorometano e isopropanol.

3 Vuelva a conectar la columna en la orientación correcta y ejecutar el disolvente a través del sistema. Use al menos 75 ml de disolvente para lavar la columna antes de proceder. Ejecutar una prueba de la inyección de un estándar que se ejecutó cuando la columna fue de nuevo y comprobar los resultados. Prestar especial atención a los tiempos de retención de pico, de asimetría de los picos y el tiempo total de análisis. El grado en que estos atributos corresponden con la ejecución inicial de la columna cuando era nuevo indicará el grado en que se ha regenerado la columna. Si los resultados no son satisfactorios, reemplace la columna con una nueva y tirar la columna de edad en la basura.