Cómo reducir la unión no específica de Contenedores

August 7

Cómo reducir la unión no específica de Contenedores


En un inmunoensayo la capacidad de unión en un envase o en los pocillos de la microplaca es mayor que la cantidad de proteína se coloca en el contenedor o pozos. Para disminuir o prevenir que los anticuerpos u otros tipos de proteínas y moléculas de absorber al recipiente o pozos, el ensayo debe ser lavado con el tampón apropiado y debe agregarse un reactivo de bloqueo específico. El tipo de tampón y el reactivo de bloqueo elegido depende del tipo de ensayo experimental.

Instrucciones

1 Recubrir los pocillos de la placa con el antígeno. Utilice una dilución de antígeno. soluciones puras de antígeno no son necesarios ya que sólo aproximadamente 3 por ciento de la proteína en la muestra es la proteína diana. Al diluir, asegurar que las muestras contienen el antígeno a una concentración que está dentro del rango de detección del anticuerpo. Pipetear la solución de dilución del antígeno por los pocillos de la placa. Algunas placas pueden ser pre-recubiertas con antígeno. Lea las instrucciones suministradas con los pocillos de la placa.

2 Se cubren las placas con un plástico adhesivo y se incuba durante la noche. Lavar las placas con las soluciones tampón, tal como solución salina tamponada con Tris o solución salina tamponada con fosfato. Para lavar, enjuagar los platos utilizando un frasco lleno de solución tampón sobre un fregadero de laboratorio. Patente de los platos con una toalla de papel para eliminar las gotas restantes de solución tampón.

3 Reducir la unión no específica de proteínas y moléculas usando un tampón de bloqueo o reactivo, tal como un bloqueador de detergente, leche en polvo o de suero bovino. El tipo de bloqueo de reactivo utilizado dependerá del ensayo. Añadir el reactivo de bloqueo a los pocillos utilizando una pipeta. Cubrir la placa de nuevo con plástico adhesivo y se incuba durante la noche.

4 Re-lavar los pocillos de la placa de nuevo utilizando una solución tampón. Estos pasos disminuir la cantidad de unión no específica que se puede producir a los pocillos de la placa antes de la adición de la solución de anticuerpo necesaria para el procedimiento. Además, los reactivos de bloqueo pueden ayudar a reducir los colores de fondo en los resultados de los ensayos.


Artículos relacionados