Algunas características de la precipitación de proteínas por sales

March 18

Algunas características de la precipitación de proteínas por sales


A bajas concentraciones, la sal puede ayudar a estabilizar las proteínas en solución y con ello, aumentar su solubilidad. En concentraciones más altas, sin embargo, la sal reduce la cantidad de agua disponible para hidratar las proteínas y, más allá de un cierto umbral, las proteínas comenzarán a precipitar. La adición de sal para eliminar las proteínas de la solución a veces se llama "desplazamiento salino".

Solubilidad

Algunas proteínas son más que otros soluble en agua. Si una proteína tiene más hidrófilo ( "amantes del agua") regiones, será más soluble que uno que es más hidrofóbico ( "agua temeroso"). A medida que aumenta la concentración de sal, las proteínas hidrofóbicas menos solubles y más precipitarán primero. proteínas estrechamente relacionados no se pueden separar por precipitación salina, porque van a precipitar a aproximadamente la misma concentración de sal, pero las proteínas que tienen muy diferentes estructuras y características a menudo se pueden separar de esta manera.

Sales

El sulfato de amonio es la sal más popular para este procedimiento, ya que tiene una muy alta solubilidad en agua, incluso a muy baja temperatura. Normalmente, usted quiere mantener su solución fría de inhibir la actividad de las proteasas, proteínas que cortan hasta otras proteínas. La concentración de sal se describe generalmente por el porcentaje de saturación, donde 25 por ciento es de 25 por ciento de saturación (la concentración a la que no más de sal se puede disolver).

centrifugación

Típicamente, se añade la sal poco a poco a la solución de proteína mientras se agitaba rápidamente (un agitador magnético es muy útil para este tipo de procedimiento). La solución se centrifuga, haciendo que algunas de las proteínas a precipitar. A menudo, este procedimiento se divide en varios pasos. Es posible, por ejemplo, comenzar con 25 por ciento de saturación (un 25 por ciento de recorte), y luego ir a un recorte del 75 por ciento. Este proceso le permite dividir las proteínas en tres grupos - los que precipitan al 25 por ciento, las que precipitan al 75 por ciento y los que precipitan en el medio.

consideraciones

Desalado requiere una cierta pérdida de la proteína que desea aislar. Cada proteína tiene su propia curva de solubilidad - la solubilidad de la proteína como una función de la concentración de soluto ( "fuerza iónica"). Por consiguiente, aunque el aumento de la concentración de sal es insuficiente para precipitar la totalidad de la proteína de interés, todavía puede precipitar algo de él. Por otra parte, no se puede utilizar la salazón a cabo para aislar una proteína específica, debido a que otras proteínas se precipitan junto con él. Por lo general, la salazón a cabo es sólo el primer paso en un proceso de purificación de proteínas.


Artículos relacionados