Electroforesis en gel Protocolos

December 9

Electroforesis en gel Protocolos


La electroforesis en gel utiliza la capacidad de las moléculas a pasar a través de un gel o matriz en respuesta a una corriente eléctrica. Se separa las proteínas, ADN o ARN basado en el tamaño y la carga de la molécula. La electroforesis en gel se utiliza en la medicina forense, la genética, el análisis de proteínas y la biología molecular. Las moléculas en el gel pueden ser visualizados y registradas por el uso de cámaras y ordenadores.

Western Blotting

Western Blot permite el estudio de proteínas específicas mediante el uso de electroforesis en gel y anticuerpos. Las proteínas a menudo tienen una estructura compleja y necesitan ser desnaturalizado con el uso de calor y detergentes; Estas sustancias también capa de la proteína para dar una carga negativa. Las proteínas se mueven a través del gel, por lo general de acrilamida, en base a su tamaño. Una vez separado del gel las proteínas se pueden transferir a una membrana, que entonces se pueden teñir para proteínas específicas utilizando anticuerpos. Las proteínas se pueden visualizar utilizando numerosas técnicas y la cantidad de proteína se puede determinar.

zymography

Zymography se basa en enzimas de transferencia pero los estudios occidentales. La acrilamida en el gel se copolimeriza con un sustrato tal como gelatina. A diferencia de la transferencia Western, las enzimas no son tratadas con un detergente. Una vez que las enzimas se han movido a través del gel, la acrilamida es químicamente eliminado, y el gel se coloca a 37 grados Celsius en un tampón para promover la actividad de la enzima. El gel se tiñó con frecuencia con azul de Coomassie y las áreas de actividad de la enzima se mantendrá sin teñir o claro.

En gel de agarosa La electroforesis

electroforesis en gel de agarosa puede separar las proteínas, ARN o ADN. Los ácidos nucleicos se separan por su tamaño, con las moléculas más pequeñas en movimiento más rápido a través del gel, mientras que las proteínas se separan por la carga debido al tamaño de los poros en un gel de agarosa. Estos geles se pueden utilizar en la genética para estudiar los ácidos nucleicos. Para visualizar ácido nucleico, que es fluorescente bajo luz ultravioleta (UV), bromuro de etidio se utiliza a menudo; Sin embargo, bromuro de etidio causa mutaciones genéticas, de manera alternativas más seguras.

Electroforesis bidimensional

electroforesis de dos dimensiones se utiliza para las proteínas separadas. Las proteínas se separaron por su carga y luego por su masa. Se utiliza a menudo en la proteómica para estudiar la expresión global de proteína en un tejido u organismo y también puede determinar las diferencias en la expresión de proteínas entre los tejidos.


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