Métodos recombinantes

March 13

Métodos recombinantes


Una pieza de ADN recombinante incluye ADN de dos fuentes diferentes --- por ejemplo, un gen para una proteína fluorescente incorporado en el genoma de una especie totalmente diferente. Los científicos usan una variedad de técnicas para manipular los ácidos nucleicos, unirse a fragmentos de ADN e insertar estas secuencias recombinantes en otras células. Estas técnicas son esenciales en la biotecnología moderna.

Enzimas de restricción

Las enzimas de restricción, a veces llamadas endonucleasas de restricción, hacen cortes en el ADN en los sitios especificados por la presencia de una secuencia de reconocimiento particular. La clase más útil de enzimas de restricción, las enzimas de tipo II, hacer cortes en el sitio de reconocimiento. Cuando hacen un corte, dejan un "extremo pegajoso" con un extremo de una sola hebra sobresaliente en la molécula de ADN. Desde los extremos pegajosos de dos piezas de ADN cortados por la misma enzima son complementarios, los científicos pueden cortar dos trozos de ADN para que tengan extremos complementarios, y luego unirlos.

ligadura

Los científicos a menudo utilizan plásmidos, pequeñas piezas circulares de ADN encontrados en muchas bacterias, para hacer copias de un gen con la tecnología de ADN recombinante. Tanto el plásmido y el fragmento de ADN que desea insertar se cortan con las mismas dos enzimas de restricción; ahora ambos plásmido y el inserto tienen extremos pegajosos correspondiente. La incubación de estas piezas de ADN con una enzima llamada colas ligasa los extremos cohesivos que emparejan juntos. Este último paso se llama ligadura o re-ligación.

Transformación

Algunas bacterias pueden tomar de forma natural los pedazos de ADN de su entorno. El caballo de batalla de laboratorio favorito, e. coli, no se encuentra entre estas especies; que puede ser inducido a tomar el ADN, sin embargo, por primera incubación en una solución de cloruro de calcio en hielo entonces brevemente la incubación a temperaturas fisiológicas (alrededor de 37 grados Celsius). Una pequeña fracción de la e. bacterias coli ocupan los plásmidos en la solución. Otra técnica similar, electroporación, implica eléctricamente "impactante" del correo. coli mediante la ejecución de una corriente a través de la solución; de nuevo, esto hace que una pequeña fracción de ellos para ocupar el ADN plásmido. Ambos métodos --- o cualquier otro método que induce a las bacterias para ocupar ADN extraño --- se llaman transformación.

medios selectivos

Algunas bacterias ahora contienen el plásmido recombinante, pero ¿cómo sabemos que las bacterias hacen y cuáles no? La forma más común para separar células transformadas del resto consiste en cultivar la bacteria en "medios selectivos." Por ejemplo, una placa de agar que contiene ampicilina, un antibiótico, va a servir. Si el plásmido contiene un gen que confiere resistencia a la ampicilina, sólo las bacterias que habían alzado el plásmido sobrevivirán y crecerán. Estos métodos permiten a los científicos para insertar genes en bacterias o hacer copias de un fragmento de ADN.


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