Cultivos celulares y técnicas de esterilización

January 19

Cultivos celulares y técnicas de esterilización


Sin trabajar con buenas técnicas estériles, los experimentos de cultivo celular puede ser una pesadilla. La contaminación es común. Hay muchos procedimientos y los pasos que se deben tomar para reducir o eliminar la probabilidad de contaminación mientras se trabaja con cultivos necesarios. La práctica de buenas técnicas estériles ahorra tiempo, energía y dinero.

llamas

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mecheros de Bunsen son indispensables en el trabajo de laboratorio estéril.

Siempre aberturas de botellas de llama cuando se vierte algo fuera de una botella. Esto no es sólo para esterilizar la abertura exterior de la botella, pero para crear una corriente de aire caliente que emana de la abertura de la botella. Esta corriente de aire caliente sube y empuja las partículas de polvo que caen o gérmenes que podrían contaminar el contenido de la botella.

asas de inoculación deben siempre ser flameado entre usos. Cuando se trabaja con los platos y los bucles de Petri, tienen un pequeño recipiente de 100 por ciento de etanol cerca. También tiene una lámpara de llama de alcohol o mechero Bunsen práctico. Para esterilizar el asa de siembra, lo mojará en el etanol y ejecutarlo a través de la llama. Sostenerlo hasta que el fuego se apaga en el bucle, a continuación, toque para el agar de la placa de Petri para enfriarlo. Está listo para su uso con células una vez que el bucle no se derrite el agar en contacto.

Trabajar bajo una campana

Siempre se debe trabajar debajo de un gabinete de bioseguridad cuando se trabaja con cultivos celulares. gabinetes de bioseguridad difieren de campanas de flujo laminar, porque se filtra el aire; en campanas de flujo laminar, el aire se acaba de distribuir. El aire filtrado plantea un riesgo mucho menor contaminación de cultivos celulares.

incubadora de Limpieza

Siempre se debe trabajar con una incubadora que está libre de cultivos contaminados. Si encuentra un cultivo celular se ha inoculado con cualquiera de un contaminante bacteriano o una levadura, limpiar la incubadora de inmediato y no poner ninguna nueva cultivos de células en ella. No hay razón para tratar desde la levadura puede ser un contaminante en el aire y la contaminación bacteriana fácilmente se propaga a través del contacto.

Al limpiar una incubadora, autoclave todas las partes desmontables y limpie el interior con una solución de lejía al 10 por ciento, seguido de un enjuague. A continuación, limpiar el interior de la incubadora con una solución de etanol al 70 por ciento y permitir que se seque al aire. No se olvide de apagar el inyector de dióxido de carbono y las alarmas asociadas al limpiar la incubadora porque la puerta a que estará abierta durante un período prolongado de tiempo.

filtración estéril

Algunos medios de comunicación se pueden esterilizar en autoclave en un ciclo de líquido, como el medio de agar para colonias placa de Petri. Otros tipos de cultivo de células, especialmente que contienen proteínas, no deben ser esterilizados en autoclave porque el calor y la presión se desnaturalizan las proteínas. Estos medios deben ser esterilizados por filtración. Los contaminantes que pueden destruir medio de cultivo celular son más grandes que 0,22 um, así filtrar el medio a través de una unidad de filtración desechable con un filtro de 0,22 um de tamaño de poro hace que un medio estéril.

El tratamiento en autoclave

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Autoclaves se comparten comúnmente entre los laboratorios.

Cuando el tratamiento en autoclave herramientas y contenedores, siempre utilice cinta de autoclave. Cubra las aberturas de contenedores con papel de aluminio y poner un pedazo de cinta de autoclave sobre la lámina. Cuando el tratamiento en autoclave líquidos como medio de agar o agua, use un ajuste de líquido por lo que no se desborde medida que se reduce la presión. ajustes líquidos reducen la presión en el interior del autoclave más lentamente que la configuración en seco para que coincida con la lenta disminución de la temperatura. Esto evita que el líquido se derrame sobre los lados de su recipiente, debido a la ebullición. Autoclaves deben fijarse a 151 grados C y que se deben ejecutar durante al menos 15 minutos a esa temperatura.

Etanol

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Aunque el etanol es el mismo alcohol en el vino, no beber etanol de calidad de laboratorio.

Cuando se trabaja en un área estéril, siempre tienen una botella de 70 por ciento de etanol útil para desinfectar las superficies de trabajo y para la desinfección de guantes. Para desinfectar un espacio de trabajo, rocíe el área con un 70 por ciento de etanol y limpie abajo con un libre de polvo toallita desechable. Para esterilizar los guantes, guantes de aerosol que llevas y frota las manos como si estuviera lavando. Deje que los guantes de aire seco, pero no soplan sobre ellos. Breath contiene contaminantes. Para acelerar el proceso de secado, puede mantener sus manos sobre la toma de aire de la cabina de bioseguridad que está trabajando bajo.

Use Desechables

Siempre que sea posible, el uso de material desechable como bucles, esparcidores, frascos y cajas de Petri que hace que la contaminación de un área de trabajo estéril mucho menos probable, aunque tiene las desventajas asociadas de mayor gasto y una mayor producción de residuos.

Hablando

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Guardar para hablar antes o después de los procedimientos estériles debido a la respiración contiene contaminantes.

Aunque a menudo es necesario explicar un procedimiento o para enseñar a alguien sobre lo que está haciendo cuando se trabaja bajo una campana, mantenga el habla a un mínimo. Si tiene previsto hablar en absoluto, usar una mascarilla. Trate de escribir lo que va a hacer de antemano para que el público puede seguir adelante sin explicaciones habladas. Solicitar que ahorran sus preguntas para después del procedimiento y sugieren que escribir cualquier pregunta o comentario que piensan de mientras se está trabajando.