Protocolo de fraccionamiento de proteínas

March 9

Con el fin de estudiar adecuadamente una proteína específica, es esencial ser capaces de purificar o separarlo de todas las otras proteínas y compuestos que se encuentran en las células. Una variedad de técnicas o protocolos han sido desarrollados para aislar proteínas específicas.

tipos

Purificación de proteínas típicamente comienza con fraccionamiento, en el que las membranas celulares se rompen o interrumpidas (mediante la adición de un detergente, por ejemplo). El homogeneizado resultante se hizo girar a alta velocidad en una centrífuga para separar los componentes celulares específicos.

Función

Una vez que el componente celular que contiene la proteína de interés se ha extraído por centrifugación, la proteína se puede aislar a través de cromatografía. Hay una variedad de técnicas cromatográficas, pero todos funcionan en el mismo principio básico. La mezcla es forzada a través de una columna rellena con una matriz de perlas o partículas pequeñas que interactúan con las proteínas y los compuestos en la mezcla. Dependiendo del tamaño, carga u otras propiedades de las proteínas, la matriz de la columna va a interactuar más fuertemente con algunos de ellos que otros, por lo que algunos de ellos saldrá de la columna antes que otros. Dependiendo de la técnica, puede ser necesario una serie de procedimientos de este tipo para purificar una proteína particular.

consideraciones

Prueba de la muestra es una parte importante de la purificación de proteínas. La electroforesis en gel es una técnica que separa las proteínas en función de su tamaño o el pH en el que no tienen carga neta; menudo electroforesis en gel se utiliza como un complemento de las técnicas de separación cromatográfica para garantizar la proteína de interés realmente ha sido aislado. Los biólogos también pueden diseñar ensayos o pruebas para identificar la proteína de interés y determinar su concentración en una muestra. Si una proteína cataliza una reacción, por ejemplo, el biólogo puede probar para la proteína mediante la adición de la sustancia química de la proteína altera a la muestra y la comprobación para ver si se produce la reacción.


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