Protocolo digitonina

October 31

Las capas de lípidos de la envoltura nuclear y de la membrana de plasma son insolubles en agua, por lo que es difícil para los investigadores para introducir moléculas solubles en agua en las células. Digitonina, un glicósido, es un detergente usado para permeabalize membranas lipídicas haciéndolos solubles en agua.

Preparación

Dependiendo de la naturaleza de las investigaciones, las células se cultivan en portaobjetos o platos preparados. Las células se lavan a continuación en tampón y, dependiendo del propósito del experimento, se fijaron con formaldehído.

permeabilización

Las células se permeabilizaron en digitonina. concentraciones de la solución pueden variar según el tipo de célula y la titulación, o pruebas experimentales que sean necesarias para identificar a una concentración óptima. Una vez permeabilizadas, las células se lavaron y se incubaron, típicamente en solución de tampón fosfato (PBS).

El bloqueo

El proceso de permeabilización se detuvo con tampón de bloqueo para evitar overpermeabilization. Las células se lavan después en tampón que contiene las moléculas solubles en agua deseado. Por último, se examinan las células.